El promotor de la alfa-tubulina de Chlorella vulgaris permite la transformación genética de una microalga verde tipo cocoide

Resumen

Las microalgas son plataforma viable para la producción de proteínas recombinantes. Aunque se han desarrollado diversas herramientas genéticas para la transformación de microalgas, algunos elementos, como los promotores endógenos, deben mejorarse para aumentar los niveles de expresión génica posterior al proceso de transformación. Por lo tanto, el presente estudio tiene como objetivo evaluar una secuencia de la región 5' del gen alfa-tubulina de Chlorella vulgaris, como promotor para la expresión de un gen resistencia a antibiótico en Chlorella sorokiniana. Mediante análisis in silico se logó identificar un promotor proximal, el cual poseía 9 potenciales elementos reguladores en cis, incluyendo Caja TATA y Caja CAAT. La secuencia promotora se usó para dirigir la expresión de un gen de resistencia a la estreptomicina (aada), previa optimización de su uso de codones. La optimización de codones de la secuencia aadale permitió obtener un contenido de GC del 69,8% (en comparación con el 53% del gen original), lo que aumenta su similitud con los genomas de Chlorellasp. (67.2%). Ambos elementos genéticos se clonaron en el vector pUC57-Kan y se transformaron en células de C. sorokinianamediante electroporación. Las colonias de microalgas transgénicas fueron identificadas a través de cultivo en medio selectivo y PCR. Nuestros resultados demostraron la capacidad del promotor alfa-tubulina de Chlorella vulgarispara expresar un gen heterólogo de resistencia a antibiótico en células de C. sorokiniana. La investigación de secuencias promotoras endógenas es esencial para lograr una expresión génica heteróloga eficiente, especialmente en microalgas utilizadas para la producción industrial como las del género Chlorella.